المبدأ الاساسي  Basic Principle

تم تقدير فعالية إنزيم  كلوتاميت-اوكزالواستيت ترانس امينيز باستخدام طريقة إنزيمية تعتمد على قياس تركيز البايروفيت هيدرازون المتكون من تفاعل البايروفيت مع 2،4 - ثنائي نايتروفنيل  هيدرازين المضاف ، اذ ان الاوكزالواستيت (Oxaloacetate) الناتج من عملية انتقال مجموعة الامين (Transamination) بوجود إنزيم  الـ (GOT)  يفقد مجموعة الكاربوكسيل ويتحول إلى البايروفيت.⁽¹⁾  

الكواشف Reagents

-1 المحلول المنظم GOT Buffer  :- يحتوي على الفوسفات المنظم (Phosphate buffer)  بتركيز mmolL (100)   عند دالة حامضية قدرها (pH=7.4) ، والاسبارتيت (L-aspartate) بتركيز  (100) mmolL ويحتوي ايضاً على الفا-كيتوكلوتاريت (α-ketoglutarate) بتركيز (2) mmolL والمحلول جاهز للاستخدام ويبقى مستقرا عند خزنه بدرجة ° C (2-8).

-2 محلول -2,4 ثنائي نايتروفنيل هيدرازين (2,4 -Dinitro phenylhydrazine ) بتركيز mmolL  (2)  ، ويكون جاهزاً للاستخدام ومستقر عند خزنه بدرجة ° C  (2-8)    .

-3 محلول هيدروكسيد الصوديوم (Sodium hydroxide):-  بتركيزmolL (4) ، يخفف محتوى علبة واحدة من الكاشف بالماء المقطر إلى ml (1000)   .

طريقة العمل Procedure

يضاف ml (0.1)  من الماء المقطر ومصل الدم  الى انابيب اختبار تحتوي  mL (0.5)  من المحلول المنظم مع الرج . وتوضع الأنابيب في الحمام المائي بدرجة حرارة °c (37)   ولمدة  (30)  دقيقة ، وبعدها يضاف لكل انبوبة ml (0.5)  من المحلول 2,4 - ثنائي نايتروفنيل هيدرازين وترج الأنابيب وتترك بدرجة حرارة °C 20)-(25  ولمدة (20) دقيقة . ثم يضاف لكل أنبوبة  ml (5) من محلول هيدروكسيد الصوديوم . وتمزج وتترك لمدة (5) دقائق بعد ذلك تقرأ الامتصاصية عند طول موجي قدره nm (546) .

الحسابات Calculations

يتم الحصول على فعالية إنزيم  الـ GOT من الشكل الاتي :-

------------------------------------------------------

1.  Reitman  S., and Frankel  S. (1957)," A calorimetric method for the determination of serum glutamic oxaloacetic acid and glutamic pyruvic transaminases " , J. Clin. Path. 28:56.