بروتوكول تحضير شرائح Poly-L-lysine لتصنيع المصفوفة المجهرية

الاساس

- البروتوكول الوارد هنا هو لتغطية 180 coating شريحة بالبولي – ل – لايسين

- تأكد من ان ماسكات او حاويات الشرائح هي مائلة قليلا ومتجهة الى الداخل في منتصفها حتى يمكن حمل الشرائح بسلامة وأمان .

- لا تستخدم قفازات ملوثة بالمساحيق في أي مرحلة من مراحل البروتوكول .

- لتفادي الغبار ابقى الشرائح مطمورة او مغمورة في المحلول في وقت من اوقات التجربة .

- حالما تصبح الشرائح مطلية او مغطاة ، فإن الشرائح يمكن ان تبقى ثابتة ومستقرة لأربعة اشهر قادمة .

- لتحضير محلول الغسل (يكفي لـ 180 شريحة) :

- تستخدم المواد والكميات الآتية :

200 غرام هيدروكسيد الصوديوم NaOH (حبيبات)

1200 مل EtoH

800 مل H₂O

- امزج محلول الغسل حتى ذوبان حبيبات NaOH  تماما

- اشطف او اغسل برفق صحون الشرائح بالماء حتى تصبح نظيفة تماما . يضاف كل ر لك او حاوية شرائح شريحة واحدة لكل طبق ، يصب محلول الغسل فوق الشرائح وتغطى .

- تهز الشرائح بلطف كل ساعتين في محلول الغسل ولابد من التأكيد على عملية الغسل والتأكد من نظافة الشرائح تماماً قبل اضافة متعدد اللايسين .

- تشطف الشرائح بعدة لترات من milli-Q H₂O  ثم تملا حاوية بالماء حتى يمكن تغطيس الشرائح . تترك الشرائح في الماء عندما يتم تحضير متعد اللايسين .

- تحضير محلول poly-L-lysine  لا تستعمل سوى المواد البلاستيكية في تحضير متعدد اللايسين ويتم التحضير باستعمال المواد والكميات التالية : (180 شريحة)

1500 مل H₂O  

295 مل PBS 1X (مرشح)

352 مل poly-L-lysine  

تضاف المواد حسب التسلسل اعلاه ثم تمزج المكونات وتوضع في بيكر بلاستيكي على صفيحة تحريك

- قبل اضافة متعدد اللايسين ، افرغ الماء من الشرائح ومباشرة يضاف محلول متعدد اللايسين بصب المحلول فوق الشرائح .

- دع الشرائح تهتز برفق في محلول متعدد اللايسين ولمدة 30 دقيقة .

- اشطف الشرائح مرة بالـ milli-Q H₂O  وبنفس الاسلوب الذي تم ذكره .

- يدور بعدها الشرائح مباشرة باستخدام جهاز طارد بسرعة 600 دورة / دقيقة حتى الجفاف (بحدود 5 دقائق)

- لغرض التأكد من ان الشرائح قد جففت تماما ، ضع راكات أي حوامل الشرائح في فرن خوائي vacume oven  لمدة 5 دقائق وبدرجة حرارة 50 م

- تخزن الشرائح في صندوق شرائح بلاستيكي ولابد من الاشارة الى ان الشرائح يجب ان تخزن لمدة لا تقل عن 14 يوما قبل ان يتموضع الـ DNA على الشريحة ويجدر الاشارة الى انه لا ينصح باستخدام الشرائح التي يزيد عمرها عن 4 اشهر وذلك لاحتمال حدوث تطل لمتعدد اللايسين . هذا ويمكن اعادة استخدام محلول متعدد اللايسين مرة اخرى بعد اتمام عملية ترشيحه وذلك بعد خطوة الشطف بالـ milli-Q H₂O   الاخيرة وخزنه في حاوية بلاستيكية وبدرجة 4 م مع مراعاة عدم اعادة الاستعمال لأكثر من 6 مرات .