تقنية المصفوفات المجهرية – الجزء العملي Microarray technology

البروتوكول العملي لتحضير المصفوفات المجهرية

تشمل الاجزاء الرئيسية لعملية تحضير المصفوفات المجهرية الآتي

• — الرنا RNA

- تجري التجارب باستخدام الرنا الكلي total RNA او الرنا المرسال mRNA حيث يتم اجراء عملية العزل والاستخلاص والتقنية .

- تجمع عينتان من الرنا الكلي او المرسال او اكثر لغرض مقارنة مستويات التعبير الجيني .

• — المصفوفة the array

- تستخدم الشرائح الزجاجية او الاغشية membranes حيث تضاف البقع spots الممثلة للجينات او نسق القراءة المفتوح open reading frame (ORF) على سطوح هذه الشرائح الزجاجية او الاغشية .

• — المجسات probes

- يحضر الدنا المتممة او المكملة الموسومة بصبغة او اثر تفلوري Fluorescently Jabeled c-DNA من نماذج الرنا RNA المعزول بتقنية الاستنساخ العكسي  Reverse transcription . اما تجمعات RNA المطلوب مقارنتها فيتم وسمها بمؤشرات  متفلورة مختلفة .

• — التهجين the hybridization

- تجري عملية التهجين بين المجسات probes والمصفوفة array

• — المسح the scan

- تغسل المصفوفة للتخلص من المجسات غير النوعية والتي لم تتهجن ثم تخضع المصفوفة للمسح ولمرتين ثم تمسح بالليزرات lasers النوعية للفلروسنت للمؤشر المستخدم .

- الـ c-DNA الموسوم بالصبغة المتفلورة سوف يضيء البقعة التي تهجن فيها مع المجس .

— التحليل the analysis

- يمكن قياس شدة التفلور fluorescent intensities  من كلا الصورتين التي تم مسحهما . وتستخدم النسبة بين الشدتين لتحديد الجيني النسبي بين هاتين المجموعتين من الخلايا

• — الاجهزة

تستخدم اجهزة متطورة لتصنيع المصفوفات المجهرية والتي تسمى بالـ arrayer  (الشكل 1) (a) و (الشكل 1) (b)

الشكل ( a  1) : المؤلف الى جانب وحدة تصنيع المصفوفات المجهرية Microarray

الشكل (b 1) : جهاز تصنيع المصفوفات المجهرية من انتاج شركة  BioRad