السلالات الفيروسية Virus Strains

الفيروس ذات صفات وخواص ثابتة تنتقل من جيل إلى آخر، ولكن أحيانا قد يطرأ عليه تغيير يؤدي إلى ظهور سلالات جديدة. تنشأ السلالة الجديدة نتيجة للطفرات التلقائية التي تحدث في الطبيعة أو الطفرات الصناعية الناتجة عن استخدام المواد الطفرة mutagenic agents وكذلك نتيجة لحدوث ظاهرة إعادة التوليف الوراثي genetic recombination.

توجد بعض الفيروسات مثل فيروس موازيك الدخان وفيروس الموزايك الأصفر في اللفت بتركيزات عالية في عوائلها قد تصل إلى ¹¹10 جزيء فيروسي في كل بقعة موضعية وإلى ¹⁴10 جزيء فيروسي في كل الورقة المصابة. وعلى هذا فهناك فرص كبيرة لحدوث طفرات تلقائيه. تقدر درجة التطفر على أساس حساب عدد الطفرات في التحضير الفيروسي أو عدد الطفرات الممكن عزلها من كل ورقة أو من كل النبات المصاب. وقد وجد أن معدل تطف فيروس موزايك الدخان يتراوح ما بين حوالى 1ر% إلى 2%.

تختلف الفيروسات في درجة إعطائها لسلالات جديدة. وقد وجد في الطبيعة أن لفيروس موزايك الدخان سلالات عديدة بين الفيروس الشجيرة القومية في الطماطم عدد قليل جدا من السلالات. كما أن مختلف سلالات الفيروس ربما تختلف هي الأخرى في درجة إعطائها لطفرات تعطي أعراضا معينة. بعض سلالات فيروس × البطاطس التي تعطي بقع شاحبة على الدخان كثيرا ما ينتج عنها طفرات تعطى على نفس النبات بقع حلقية موضعية. كما أن سلالات فيروس نيكروزس الدخان التي تعطي بقع بيضاء على اللوبيا كثيرا ما تفتح طفرات تعطى على نفس النبات بقع حمراء.

الاختلاف في درجة ظهور السلالات ربما لا يرجع بالضرورة إلى اختلافات في معدل التطور الحقيقي. بعض الفيروسات أو السلالات قد تعطى نسبة كبيرة من الطفرات الناقصة أو غير الحيوية أكثر من غيرها.

الحامض النووي الفيروسي هو المادة الحاملة للمعلومات الوراثية الفيروسية، لذا فإن تغيير صفة أو أكثر من صفات الفيروس (ظهور سلالات جديدة) لابد وأن تعكس التغييرات التي حدثت في الحامض النووي الفيروسي. أن الحامض النووي يتكون من أنواع من النيكلوتيدات تختلف نسبها باختلاف الفيروسات. الاختلافات بين السلالات الفيروسية ترجع إلى الاختلافات في تتابع الوحدات النيكلوتيدية في بعض أجزاء الحامض النووي. تتابع الوحدات النيكلوتيدية يمثل شفرة code تحكم تتابع الأحماض الأمينية في البروتين الفيروسي. وعلى هذا فإن تغيير تتابع الوحدات النيكلوتيدية قد تغير من تتابع ونوعية الأحماض الأمينية الداخلة في تركيب البروتين الفيروسي.

العوامل المطفرة Mutagenic agents:

استخدم العديد من العوامل الطبيعية والكيماوية، التي ثبت تأثيرها المطفر على كائنات أخرى، لمعرفة تأثيرها على الفيروسات ومنها الأشعة فوق البنفسجية وأشعة X ودرجة الحرارة المرتفعة، والانزيمات، و 5- فلورویوراسیل 5- Fluorouracil -، وهيدروكسيل امين Hydroxylamine، وحمض النيتروز Nitrous acid والداي ميثيل سلفيت Dimethyl sulfate وغيرها. وفيما يلى تأثير بعض العوامل المطفره على الفيروسات النباتية.

1- أشعة X والأشعة فوق البنفسجية

X - Irradiation and Ultraviolet irradiation

عامل Kousche and stubbe عام 1939 ، 1940 أوراق الدخان بأشعة x قبل أو بعد عدواها بفيروس موزايك الدخان وقد تمكن الباحثان من عزل عدد قليل من الطفرات ولكن معدل التطفر لم يكن عاليا بالدرجة التي تعطي برهانا قاطعا على أن المعاملة شجعت نشوء طفرات. وقد أعاد Mundry سنة 1957 دراسة تأثير أشعة X والأشعة فوق البنفسجية على معدل تطفر الفيروس وتوصل إلى أنه لا يوجد برهان قاطع على وجود تأثير طفري لأشعة x والأشعة فوق البنفسجية على فيروس موزايك الدخان.

2- الحرارة المرتفعة Elevated temperature:

لاحظ مختلف البحاث زيادة عدد السلالات الممكن عزلها من النباتات المصابة إذا ما نمت على درجات حرارة مرتفعة. وقد درس Mundry سنة 1957 إنتاج بقع صفراء تحتوى سلالات طفرية في نباتات الدخان المصابة بفيروس موزايك الدخان، وباستخدام عزله عالية النقاوة من هذا الفيروس وجد أن 3 بقع صفراء لكل نبات تظهر على درجة 17م، 35 بقعة لكل نبات على 35 م وقد اقترح الباحث أن هذه الزيادة قد ترجع إلى زيادة معدل التطور الا أنه توجد بعض الأدلة على أن تكاثر دلالات معينة قد يلائمه درجات حرارة معينة وعلى هذا فمن المحتمل أن تأثير الحرارة يكمن في ملاءمته لبعض أنواع الطفرات التلقائية التي تتواجد أصلا في التحضير الفيروسين

3- حامض النيتروز Nitrous acid:

من أكثر المواد الكيماوية المطفرة التي درس تأثيرها على الفيروسات النباتية وخاصة فيروس موزايك الدخان. أثبت موندري وجيرر عام 1958 Mundry and Gierer الكفاءة العالية لحامض النيتروز كمادة مطفره لفيروس موزايك الدخان. وقد استخدم الباحثان نبات دخان مفرق Java tobacco يعطى بقعا موضعية شاحبة مع السلالة الأصلية وبقع نيكروزيه مع الطفرات، ووجد أن نسب البقع الموضعية النيكروزية تزداد بزيادة مدة المعاملة. فمثلا في إحدى التجارب كان هناك زيادة من 21ر% عند الزمن صفر إلى و 5ر15% بعد 96 دقيقة من معاملة الحامض النووي (RNA) للفيروس بنيتريت الصوديوم Na NO2 عند 8ر4 pH =.

درجة التطفر (انتاج بقع موضعية نيكروزية على Java tobacco) لا تتأثر وجود الغطاء البروتيني للفيروس. فدرجة التطفر كانت متماثلة بالنسبة للفيروس الكامل المعامل و RNA الفيروسي المعامل و RNA المعزول من جزيئات الفيروس الكاملة المعاملة.

يرجع أثر هذا الحامض إلى تأثيره على مجاميع الأمين حيث يحدث إزالة تأكسدية لهذه المجاميع oxidativo loamination من القواعد المحتوية على المجاميع الأمينية في RNA. ونتيجة لذلك يتحول الأدينين إلى هيبواکسانزين hypoxanthine والجوانين إلى اکسانزين xanthine ، وهاتين القاعدتين لا يوجدان طبيعيا في RNA فيروس موزايك الدخان. وأما السيتوزين فيتحول إلى اليوراسيل. عند تناسخ الحامض النووي فان الاكسانزين يرتبط مع السيتوزین ( مثل الجوانين ) أما الهيبواکسانزين فلا يرتبط مع اليوراسيل (مثل الأدينين) وإنما يرتبط مع السيتوزين. اليوراسيل يرتبط مع الادينين.

4- 5 فلورویوراسیل 5- fluorouracil:

بعض مشابهات القواعد base analogues تدخل في تركيب RNA الفيروس عندما يعامل النبات الذي يتكاثر فيه الفيروس بهذه المركبات. 5- فلورویوراسیل يدخل في تركيب جزء كبير من RNA فيروس موزايك الدخان، وقد وجد أن التحضيرات الفيروسية التي حل فيها 5- فلورویوراسیل محل 36 -56% من اليوراسيل زاد معدل تطفرها 5-10 مرات قدر معدل التطور الطبيعي.

خلال تناسخ RNA الفيروسي فان 5- فلورویوراسیل يشبه في سلوكه اليوراسيل ويرتبط مع الادينين. أحيانا وخاصة عندما يكون المركب في حالته الاينوليه enol form فانه يتفاعل مثل السيتوزين ويرتبط مع الجوانین.

5- هيدروكسيل أمين Hydroxylamine:

ذات أثر مطفر على RNA فيروس موازيك الدخان وليس على الجزيء الفيروسي الكامل. قد يرجع الأثر المطفر لهذا المركب إلى مهاجمته للسينوزين وتحويله إلى مركبات شبيهة باليوراسيل تسلك سلوك اليوراسيل.

وقد ساهمت الطفرات الفيروسية لفيروس موزايك الدخان وخاصة المستحدثة بالمواد المطفره في تفهم الشفرة الوراثية genetic code.

عزل السلالات الفيروسية

قد توجد سلالات فيروس ما في الطبيعة على أصناف أو انواع عائل معين أو في مناطق معينة، كما قد تنشأ السلالات أيضا على نفس النبات المصاب جهازيا بالسلالة العادية إذ تظهر أعراض غير عادية. هذه الأعراض قد تكون على هيئة بقع صفراء صغيرة أو نيكروزيه، على جزء من أجزاء الورقة المصابة بالموزايك وتحوى سلالات مختلفة عن السلالة الأصلية.

من أكثر الطرق استخداما لعزل السلالات الجديدة هي عزل الفيروس من البقع الموضعية التي تتكون عند عدوى بعض أنواع النباتات وتتلخص الطريقة في أن يخفف مستخلص النسيج المصاب بالماء ثم يعدى به أوراق نباتات تعطي بقعا موضعية عند اصابتها بالفيروس. نتيجة للتخفيف الشديد لمستخلص الجزء النباتي المصاب فانه عند إجراء عملية العدوى يدخل في خلايا أنسجة النبات المعدي عدد قليل من الجزيئات الفيروسية أو جزيء فيروسي واحد يتكاثر وينتقل خلال البلازمودزماتا إلى الخلايا المجاورة حيث يتكاثر أيضا، وينشأ عن ذلك بعض البقع الموضعية على النبات كمناطق تكاثر للفيروس. بعد 3 - 5 أيام من العدوى يقف انتشار الفيروس إلى الخلايا المجاورة عند هذا الحد نتيجة لفعل الحواجز الدفاعية النباتية. كل بقعة هي في الواقع منطقة تكاثر جزيء فيروسي واحد أو بعض الجزيئات الفيروسية وبالتالي إذا ما قطعت بقعه موضعية واحدة وأخذ مستخلصها فان هذا المستخلص غالبا ما يحتوي على سلاله فيروسية متماثلة.

في بعض الحالات قد تحتوى تلك البقع الموضعية على خليط من السلالات وبالتالي لضمان الحصول على سلالة فيروسية عالية النقاوة لا بد من تكرار عملية العدوى والعزل عدة مرات من خلال البقع الموضعية التي يكونها الفيروس. تقطع البقع الموضعية الناتجة من العدوى الأخيرة ثم يعمل مستخلص من كل بقعه ويعدى به نباتات تعطي أعراضا جهازية. وهذه النباتات تستخدم كمصدر الدراسة الدلالة أو السلالات الجديدة.

تستخدم هذه الطريقة مع الفيروسات التي تعطي على بعض أنواع النباتات بقعا موضعية مثل فيروس موزايك الدخان على Nicotiana glutinosa ، Datura stramonium، وفيروس x البطاطس على Gomphrena globosa

بالنسبة لتلك الفيروسات التي لا يعرف لها نباتات تعطى بقعا موضعية فيتم عزل سلالاتها النقية عن طريق تلقيح النباتات التي تعطي أعراضا جهازية، ويجب أن يتم التلقيح تحت ظروف تضمن أن عدوى كثيرا من النباتات يتم عن طريق جزيء فيروسي واحد. ويمكن إجراء ذلك عن طريق التلقيح بالتحضير الفيروسي المخفف بالدرجة التي تسمح بعدوى أقل من نصف النباتات الملقحة.

أوجه التشابه والاختلاف بين سلالات الفيروس

تتشابه سلالات الفيروس الواحد في الصفات الآتية: محتوى الحامض النووي من القواعد النتروجينية، محتوى الغطاء البروتيني من الأحماض الأمينية مورفولوجي الجزيئات الفيروسية، العلاقات السيرولوجية، الخواص الطبيعية، الأعراض، المدى العوائلي، طرق النقل والانتاجية. كما تختلف السلالات أيضا في صفة أو أكثر من الصفات السابقة الذكر.

1- الحامض النووي:

سلالات الفيروس الواحد تختلف اختلافا طفيفا في محتوى القواعد النيتروجينية لأحماضها النووية.

2- الغطاء البروتيني:

قد تختلف السلالات في محتوى غطائها البروتين من الأحماض الأمينية.

بدراسة الأحماض الأمينية الداخلة في تركيب بروتين ۷ سلالات لفيروس موزايك الدخان، وجد أن أحد هذه السلالات تحتوي على الهيستدين histidine والميثيونين methionine بينما لا تحتوي السلالات الأخرى على هذين الحمضين.

بما أن سلالات الفيروس الواحد قد تختلف في محتوى غطائها البروتيني من الأحماض الأمينية لذا من المتوقع أن تختلف في مقدار الشحنة الصافية على سطوح جزيئاتها وبالتالي في نقطة التعادل الكهربائي isoelectric point.

3- العلاقات السيرولوجية:

تختلف السلالات في درجة تفاعلاتها السيرولوجية وباستخدام طريقة الامتصاص المتبادل cross absorption يمكن معرفة درجة القرابة السيرولوجية بين سلالات الفيروس الواحد. تختلف السلالات ايضا في كمية الفيروس اللازم للوصول إلى معادلة المصل المضاد في اختبارات الترسيب وكذلك تختلف في درجة التخفيف النهائية للمصل المضاد لكل منها.

4- الخواص الطبيعية:

قد تختلف السلالات في خواصها الطبيعية، إلا أنه يجب الأخذ في الاعتبار أن تلك الاختلافات قد تكون غير حقيقية، إذ أن بعض هذه الخواص مثل درجة الحرارة المميتة تتأثر بمدة عوامل منها تركيز الفيروس، و pH الوسط ومكونات العصير وغيرها.

5- الأعراض:

الأعراض التي تعطيها مختلف سلالات الفيروس الواحد على نفس أصناف وأنواع النبات العائل قد تختلف من حالات مستترة إلى أعراض موزايك تختلف في درجة شدتها إلى أمراض نيكروزية مميتة. ولقد لوحظت الاختلافات في شدة الأعراض بين سلالات فيروس التجعيد القمي في بنجر السكر، وسلالات فيروس X البطاطس ، وسلالات فيروس Y البطاطس ، وسلالات فيروس موزايك الدخان وغيرها.

6- المدى العائلي:

كثيرا من سلالات الفيروس قد يكون لها مدى عوائلي واحد. البعض الآخر من السلالات قد يختلف اختلافا طفيفا بينها البعض الثالث قد يختلف في مداه العوائلي اختلافا بينا. كثيرا من سلالات فيروس موزايك الدخان لها مدى عوائلي واسع فهي تصيب نباتات العائلة الباذنجانية وبعض العائلات الأخرى، كما أن بعضها يصيب بعض نباتات العائلة القرعية معطية عليها بقع موضعية. أما فيروسات الخيار 3، 4، والتي تعتبر سلالات الفيروس موزايك الدخان تصيب عادة نباتات العائلة القرعية فقط معطية عليها أعراضا جهازية.

7- طرق النقل:

قد تختلف السلالات في علاقاتها مع الحشرات الناقلة. بعض سلالات فيروس ما قد تنتقل بأنواع مختلفة من الحشرة بينما البعض الآخر لا ينتقل إطلاقا.

8- الانتاجية:

قد تختلف سلالات الفيروس الواحد اختلافا بينا في كمية الفيروس المنتجة في العائل تحت ظروف قياسية. السلالة العادية لفيروس موزايك الدخان أكثر إنتاجية بينما السلالات الأخرى ذات إنتاجية أقل يختلف مداها، وتصل بالنسبة للبعض إلى 110 السلالة العادية. كما تختلف السلالات في درجة تكاثرها وتحركها في نبات معين على درجات الحرارة المختلفة. باستخدام النقل المتوالي على نباتات الدخان. على درجات الحرارة المرتفعة، أمكن عزل سلالة لفيروس موزايك الدخان تتضاعف بكفاءة على درجة 36 م.

الوقاية المتبادلة Cross protection

تلاحظ ظاهرة الوقاية المتبادلة عند العدوى المتتالية للنبات العائل بسلالة أو بأخرى من نفس الفيروس. لو أعديت نباتات الدخان بسلالة من فيروس موزايك الدخان ثم بعد مرور بعض الوقت عندما يصبح المرض جهازيا تعدى النباتات بسلالة أخرى من نفس الفيروس فإن السلالة الأخيرة يضعف تكاثرها أو قد لا تتكاثر إطلاقا، ويصعب ملاحظتها في أنسجة النبات، وبالتالي فإن الاصابة سلالة فيروسية تحمي النبات من الاصابة بسلالة أخرى من نفس نوع الفيروس.

وجد ماکيني عام ۱۹۲۹ Mckinney أن نباتات الدخان المصابة بسلالة الموزايك الأخضر لفيروس موزايك الدخان لم يظهر عليها أعراضا أخرى إضافية عند عدواها بسلالة الموازيك الأصفر لنفس الفيروس. وقد وجد سالامان عام ۱۹۳۳ Salaman ان نباتات الدخان المصابة بسلالة ضعيفة من فيروس × البطاطس كانت منيعة ضد الاصابة بسلالة أخرى شديدة من نفس الفيروس.

ويطلق على تلك الظاهرة اسماء مختلفة منها الوقاية المتبادلة cross protection

التضاد antagonism أو عدم التوافق interference .

إن اختبارات الوقاية المتبادلة لمدة طويلة كان لها أهمية كبرى لمعرفة إذا ما كان عزلتين فيروسيتين عبارة عن سلالتين متقاربتين لنفس الفيروس ام لا إلى أن اظهرت نتائج الأبحاث أن تلك الظاهرة لا يمكن تعميمها على كل الفيروسات. فقد تظهر سلالات فيروس ما وقاية متبادلة بينما سلالات فيروس آخر قد تظهر وقاية جزئية او لا تظهر وقاية إطلاقا. فلا توجد درجة عالية من الوقاية بين سلالات فيروس موزايك الدخان أو بين سلالات فيروس موزايك الخيار أو بين سلالات فيروس التبقع الحلق في الدعان. أما بالنسبة لفيروس x البطاطس مثلا فبعض سلالاته قد تظهر وقاية متبادلة، بينما البعض الآخر يعطى وقاية جزئية والبعض الثالث لا يتميز بهذه الظاهرة. كما أن معظم سلالات فيروس تجمد قمة بنجر السكر لا تتميز ايضا بهذه الظاهرة.

تدل الظواهر في معظم الحالات على وجود علاقة بين درجة الوقاية المتبادلة ودرجة القرابة السيرولوجية. الوقاية المتبادلة تكون كاملة بين السلالات المتقاربة جدة، بينما بين السلالات ذات القرابة البعيدة نسبيا تكون غير كاملة.

تتأثر درجة الوقاية المتبادلة بالعوامل الآتية:

1- الفترة بين العدوى الأولى والثانية:

درجة الوقاية قد تتأثر بالمدة بين العدوى بالسلالة الأولى والسلالة الثانية، باستخدام سلالتي X^H , X^G لفيروس X البطاطس لحماية نباتات الدخان من الاصابة بخمس سلالات أخرى شديدة العدوى من نفس الفيروس وجد أن النتائج المتحصل عليها تتباDن وتختلف عندما تكون المدة 5 أيام. بزيادة المدة تزداد درجة الوقاية وعندما تكون المدة 8 أيام فإن الوقاية تكون كاملة.

2- عمر وحالة النبات:

يحدد عمر وحالة النبات بدرجة كبيرة، سرعة انتشار الفيروس خلال الأنسجة المختلفة. إذا كان نمو النبات ضعيفا نتيجة لعدم ملاءمة الظروف البيئية فإن سرعة تكاثر الفيروس تقل وبالتالي فإن حماية النبات من الاصابة بالسلالة الشديدة قد تكون غير كاملة.

3- نوع النبات:

بعض السلالات الضعيفة من فيروس موزايك الدخان تحمى نباتات Nicotiana sylvestris من العدوى بسلالة موزايك أوكيوبا aucuba mosaic ولكنها تعطى وقاية جزئية إذا ما استخدمت بعض أنواع الدخان الأخرى. كما وجد أيضا أن ، سلالات ضعيفة من فيروس x البطاطس تظهر وقاية كاملة في نباتات Datura stramonium ولكنها لا تظهر تلك الوقاية في نباتات D. metal

4- كمية اللقاح:

عدوى النباتات المصابة بسلالة فيروسية ضعيفة بلقاح يحتوي على تركيز عالي من سلالة أخرى لنفس الفيروس قد يقلل من درجة الوقاية. استخدام لقاح يحتوي على تركيز عالي من فيروس موزايك الاكيوبا (يعطي بقع ميتة على N. sylvestris ) يؤدى إلى ظهور بقع ميتة على أوراق N. sylvestris المصابة بسلالة الفيروس الضعيفة التي تعطي أعراض موزايك، ولكن البقع في تلك الحالة تظهر في المناطق الخضراء من الورقة حيث تركيز فيروس السلالة الضعيفة يكون منخفضا جدا.

لا يوجد في الوقت الحالي معلومات كافية عن كيفية تفاعل السلالات داخل الخلايا وبالتالي كيفية حدوث الوقاية المتبادلة. وقاية أو مقاومة النبات ضد الاصابة بسلالة أخرى من نفس الفيروس تتم عندما تكون السلالة الأولى موجودة في معظم انسجة النبات (تعطى أعراضا جهازية). إذا ظلت لأي سبب من الأسباب بعض أجزاء النبات خالية من السلالة الأولى فان تلك الأجزاء تصاب اثناء العدوى التالية بنفس السلالة الفيروسية أو بسلالات أخرى من نفس الفيروس. يطلق على المقاومة التي يكتسبها النبات بهذه الطريقة المقاومة المكتسبة غير النقية monsterile acquired resistance وذلك للتفريق بينها وبين نوع آخر من المقاومة يطلق عليه المقاومة المكتسبة النقية sterile acquired resistance.

المقاومة المكتسبة النقية:

يتميز هذا النوع من المقاومة بأن أجزاء من النبات تصاب بالفيروس وأجزاء أخرى قريبة أو بعيدة عن الجزء المصاب يكتسب مقاومة ضد الإصابة بنفس الفيروس أو أحد سلالاته وأحيانا بعض الفيروسات الأخرى. لوحظ عند عدوى أوراق نبات دخان Samsun NN بتركيزات مخففة جدا من فيروس موزايك الدخان ثم عدواها مرة ثانية على فترات مختلفة بتركيز عالي من نفس الفيروس وجود منطقة من أنسجة النبات حول البقعة الموضعية الناتجة عن العدوى الأولى ذات مقاومة عالية للإصابة الثانية. تزداد تلك المنطقة في حجمها ودرجة مقاومتها بزيادة المدة ما بين العدوى الأولى والثانية حتى تصل إلى أقصاها إذا ما حدثت العدوى الثانية بعد أيام من العدوى الأولى. المقاومة ليست خاصة ضد فيروس معين، إذ وجد أن المنطقة المحيطة بالبقع الموضعية الناتجة عن الاصابة بفيروس موزايك الدخان مقاومة للإصابة بفيروس نيكروزس الدخان وعدد آخر من الفيروسات.

إن المقاومة لا تظهر فقط في الأجزاء المحيطة بمنطقة الاصابة ولكنها تظهر ايضا في أوراق أخرى بعيدة عنها. تقدر درجة المقاومة في تلك الحالة بدرجة قلة حجم أو عدد البقع الناتجة. وجد عند عدوى الأوراق العلوية لنبات دخان Samsun NN بفيروس موزايك الدخان بعد فترة من عدوى اوراقه السفلية بنفس الفيروس أن البقع الموضعية المتكونة على الأوراق العلوية يقل حجمها فتصل إلى 15 أو 13 مثيلاتها على نبات الكونترول الذي عديت أوراقه العلوية فقط بنفس الفيروس. تلاحظ المقاومة إذا ما أجريت العدوى الثانية بعد 2 - 3 أيام من العدوى الأولى وتصل إلى أقصى درجة لها إذا ما تمت العدوى الثانية بعد أيام من العدوى الأولى. تحتفظ الأوراق بقدرتها على المقاومة لمدة ۲۰ يوم. يجب الأخذ في الاعتبار أن الأوراق المقاومة كانت خالية من الفيروس قبل إجراء العدوى الثانية.

أن المقاومة المكتسبة للأوراق البعيدة عن الأوراق المصابة ضد العدوى بنفس الفيروس أو بفيروسات أخرى ترجع إلى انتقال مواد معينة مشجعة للمقاومة من المنطقة المصابة إلى الأوراق الأخرى. عند قطع العرق الوسطى للأوراق العليا لنبات الدخان فان المقاومة لا تلاحظ في مناطق الورقة البعيدة عن منطقة القطع. كما وجد أنه عند عدوى أوراق نبات الدخان الصغير بالفيروس وقطع الأوراق المعداه بعد 7 أيام من العدوى فان الأوراق الجديدة كانت مقاومة.

وقد تمكن بعض العلماء من فصل الفيروس من مستخلصات النباتات المصابة. وقد أدى خلط مستخلص النبات المصاب الخالي من الفيروس بتحضير فيروسي إلى خفض عدد البقع الناتجة إذا ما قورنت بمستخلص النبات السليم المعامل بنفس الطريقة ما يدل على وجود عامل مثبط. وقد وجد هذا العامل في أوراق النباتات المصابة بفيروس موزايك الدخان وفيروس Y البطاطس. كما وجد أيضا في الأوراق العلوية لنبات دخان جلوتينوزا بعد عدوى أوراقه السفلية بفيروس موزايك الدخان. يوجد من الأدلة ما يدل على أن هذا العامل ذا طبيعة بروتينيه.

اعادة التوليف الوراثي او التهجين

Genetic recombination or Hybridization

لوحظ حدوث إعادة التوليف الوراثي في الفيروسات لأول مرة في الفيروسات البكتيرية الكبيرة مثل T₂ الذي يصيب coli. Eلأجراء عملية اعادة التوليف الوراثي تعدى البكتريا في آن واحد بسلالتين يتساويان تقريبا في درجة التكاثر والقدرة على العدوى ويختلفان على الأقل في صفتين وراثيتين معروفتين، ثم يختبر الجيل الناتج من العدوى وإذا وجد ان بعض أفراد الجيل تحتوي على الصفتين الغير موجودين في أي من السلالتين الاصليتين معا فان ذلك يعني أن إعادة التوليف الوراثي قد حدثت وساد الاعتقاد بعض الوقت ان اعادة التوليف الوراثي أو التهجين بين السلالات الفيروسية يحدث في الفيروسات المحتوية على DNA إلا أنه ظهر أن ذلك قد يحدث أيضا بين سلالات بعض الفيروسات الحيوانية التي تحتوي على RNA أحادي الخيط.

ونظرا لصعوبة إجراء مثل هذا النوع من التجارب فان عددا قليلا جدا من الأبحاث قد عملت لدراسة اعادة التوليف الوراثي في الفيروسات النباتية. وقد بين بست Best في أعوام 54، 57، 61، 1968 إن إعادة التوليف الوراثي يحدث بين سلالات فيروس الذبول المتبقع في الطماطم. استخدم الباحث سلالتين من هذا الفيروس يختلفان في أعراضهما على عوائل نباتية. السلالة A تعطي أعراضا شديدة والسلالة E تعطي أعراضا ضعيفة جدة. تم تنقية السلالتين عن طريق العزل من خلال البقع الموضعية، ثم أجريت عملية العدوى لنباتات الدخان ودخان جلوتينوزا والطماطم بلقاح مختلط يحتوي على السلالتين. أخذت أنسجة من النباتات المصابة وعن طريق العدوى لعائل يعطي بقعا موضعية أمكن الحصول على الكثير من العزلات ومن بينها سلالات جديدة تختلف عن A او E ولكنها اكتسبت بعض الصفات الخاصة بالأعراض symptom characters من كل من السلالتين.