ان من افضل الكواشف المستخدمة لتكوين الانهيدريد بناتج جيد وبدون راسيمية⁽¹⁾ هو الايزوبيوتيل كلوروفورمات Isobutyl chloroformate . ولاجل تحضير الانهيدريد، يذاب الحامض الاميني المحمي في رباعي هيدروفيوران او دايوكسان او كلوروفورم ثم تضاف كمية مولية مكافئة من الايزوبيوتيل كلوروفورمات بوجود قاعدة ثلاثية tertiary base مثل ثلاثي اثيل امين، او ثلاثي بيوتيل امين او N-مثيل مورفولين وبعدها يضاف استر الحامض الاميني الثاني ويتم التفاعل في ظروف جافة وفي محيط بارد وكما موضح في المعادلة الاتية:

ان التاثير الحاث لمجموعة الايزوبيوتيل يجعل الهجوم النيوكليوفيلي على ذرة كاربون الكاربونيل لمجموعة الايزوبيوتيل يكون نوعا ما مثبطا. ومع ذلك فان مثل هذا التفاعل الجانبي قد حصل عند استخدام المجموعة الواقية trityl او tosyl للحامض الاميني كما موضح في التفاعل ادناه^{( 2)}:

كما يمكن تحضير الانهيدريد من تفاعل مشتق الحامض الاميني مع كلوريد الحامض الاليفاتي او الاروماتي بوجود قاعدة ثلاثية^{( 3)}.

--------------------------------------------------------------------------------------------------------

1- B.F. Erlanger, W.V. Curran and N. Kokowsky, (1958), “Synthesis of peptides related to gramicidin S. II. The decapeptide containing D-tyrosine residues in place of D-phenyl alanine”, J. Am. Chem. Soc., 80, 1128.

2- H.D. Jakubke and H. Jeschkit, (1977), “Amino Acids Peptides and Proteins”, The Macmillan Press LTD, p. 67.

3- J.R. Vaughan and R.L. Osato, (1951), “Preparation of peptides using mixed carboxylic acid anhydrides”, J. Am. Chem. Soc., 73, 5553.