المبدأ الاساسي Basic Principle 

استخدمت في تقدير فعالية  إنزيم  الفوسفاتيز القاعدي طريقية إنزيمية , والتي تتضمن اضافة فوسفات الفنيل (Phenyl phosphate) وهي المادة الاساس (Substrate) التي يعمل عليها إنزيم  الفوسفاتيز القاعدي في مصل الدم ويحضن التفاعل لمدة ربع ساعة في درجة حرارة (37) °C  درجة مئوية ويعمل الإنزيم  على تحويل فوسفات الفنيل إلى الفينول  (Phenol) الذي يمكن الكشف عنه وتقديره كمياً وذلك باضافة المحلول 4- امينوانتي بايرين (4-amino-antipyrin) وبوجود Alkaline potassium ferricyanide والذي يكون معقداً احمر اللون يعرف بالكينون والذي يمكن قراءة الامتصاصية له عند طول موجي nm  (510) .⁽¹⁾

الكواشف Reagents

-1 محلول مادة الاساس المنظم Substrate Buffer Solution :- يحتوي على فوسفات الفنيل الثنائية  الصوديوم    (Disodium phenylphosphate)   بتركيز   (5)  mmolL  مع   محلـــــول (Carbonate - bicarbonate) بتركيزmmolL  (50)  وفي دالة حامضية (pH=10).

-2 المحلول القياسي Standard Reagent :- يحتوي على الفينول (phenol) ويكافئ  (20)  وحدة كايند-كنك .

-3 المحـلول المثبط BLoking  Reagent :- يحتوي على 4- امينو انتــي بايريـــــن  (4-amino-antipyrine)  بتركيزmmolL (60) بالاضافة لاحتوائه على ارسينات الصوديوم (Sodium arsenate) بتركيز gL  (75)  .

-4 المحلول الملون dye Reagent :- يحتوي على سيانيد البوتاسيوم الحديديكي (Potassium  ferricyanide) بتركيز mmolL    (150)  .

طريقة العمل Procedure

تم وضع في ثلاثة انابيب اختبار  ml (2) من المادة الاساس , ووضعت الانابيب في الحمام المائي بدرجة  °C (37)  لمدة  (5)  دقائق ، ثم أضيف µL  (50)  من المحلول القياسي ومصل الدم والماء المقطر واعيدت الانابيب إلى الحمام المائي وبدرجة الحرارة نفسها ولمدة  (15)  دقيقة ، ثم أضيف إليها  (0.5) ml  من المحلول المثبط وتمزج جيداً ويضاف بعدها   ml(0.5) من المحلول الملون . ووضعت جميع الانابيب في مكان مظلم ولمدة (10) دقائق بعدها سجلت الامتصاصية للعينات عند طول موجي قدره nm   (510)  مقابل المحلول الكفء .

الحسابات Calculations

تم حساب فعالية إنزيم الفوسفاتيز القاعدي بوحدة كايندكنك (Kind and King)  وحسب العلاقة الاتية :

وحدة كايندكنك (Kind and King) : وهي الوحدة التي تحرر mg (2)  من الفينول خلال  (15)  دقيقة تحت ظروف التفاعل من درجة حرارة °c  (37)  ودالة حامضية (pH= 10-9.6)  .

يتم قياس النتيجة بلوحدة الدولية 1UL  = النتيجة بوحدة كايندكنك (Kind and King)  7.09 X

-----------------------------------------------------

1. Belfield A. and Goldberg D. M. (1971)," Revised assay for serum    phenylphosphatase activity using 4-amino-antipyrine, Enzyme", 12:    561-573.