يوضح علم الإنزيمات المتوسط للكيموتربسين الخصائص العامة للتحفيز الإنزيمي

يحفز الكيموتربسين حلمهة (Hydrolysis) الروابط الببتيدية التي يساهم في مجموعتها الكربوكسيلية حمض أميني أروماتي (الفينيل ألانين (Phe) أو التيروزين (Tyr) أو التريبتوفان (Try) ) أو حمض أميني ذي مجموعة R لا قطبية ضخمة (الميثيونين Met) كما يحفز الكيموتربسين — كالعديد من البروتيازات الأخرى — حلمهة بعض الإسترات (Esters). وفي حين أنه ليس لمقدرة الكيموتربسين على تحفيز حلمهة الإسترات أهمية فيزيولوجية، إلا أنها تسهل دراسة الآلية التحفيزية.

وتسهل الركيزة المصنعة (Synthetic) المسماة بارا — نترو فينيل أسيتات (nitrophenylacetate-p (الشكل 10-1) تحليل نشاط الكيموتربسين بالقياس اللوني، لأن حلمهة هذه الركيزة تطلق بارا - نترو فينيل الذي ينقلب في الوسط القلوي إلى الأنيون بارا - نترو فينيلات الصفراء التي يمكن تعيين تركيزها مباشرة باستعمال مقياس الطيف الضوئي، وهو جهاز يقيس امتصاص (Absorbance) الضوء عند أطوال الموجات المختلفة للضوء.

الشكل 10-1 : بارا - نترو فينيل أسيتات (PNPA).