يمكن قياس التغيرات التي تحصل في تفاعل إنزيمي معين عندما يتم الربط مع تفاعل آخر يسهل عندة قياس التغيرات الحاصلة فعلى سبيل المثال يقوم Ala transferase بالمساعدة في تفاعل Ala مع oxoglutarate-2

L- Ala + 2-oxyglutarate ↔ L-Glu + pyruvate

المواد المتفاعلة أو المواد الناتجة لا تعطي أي لون ولا تمتص الأشعة فوق البنفسجية إلا انه بالإمكان متابعة التفاعل باستخدام جهاز الطيف عندما يربط مع تفاعل ثاني عندما يستعمل البيروفيت الناتج من التفاعل الأول كمادة أساس للإنزيم dehydrogenase lactate .

Pyruvate + NADH + H⁺↔ lactate + NAD⁺

حيث يمتص NADH الضوء على طول موجي 340 نانوميتر وبذلك يمكن تتبع سير التفاعل ومراقبته على هذا الطول الموجي حيث يكون التفاعل الثاني كمؤشر السرعة التفاعل الأول. فعلى سبيل المثال التفاعل التالي:

حيث أن الإنزيم الأول E₁ يساعد في التفاعل الأولى وان الإنزيم الثاني E₂ يساعد في التفاعل الكاشف في الوقت صفر، فأن t=0 حيث يكون تركيز كل من المادة B والمادة C يساوي صفر ويكون تركيز A كمية ثابتة وغير محدودة فعندما تكون هناك مواد أساس أو عوامل مرافقة لإنزيمات E ₁ , E₂ مثل NADH كمادة أساس مرافقة وكان الإنزيم الثاني هو lactate dehydrogenase وعندما تكون تلك المواد في بداية التفاعل عند تراكيز ثابتة وغير محددة وخلال استمرار سير التفاعل، فأن تركيز البيروفيت (B) الذي فيه E₂ هو lactate dehydrogenase سيزداد تركيز البيروفيت الأصلي الذي كان صفرا، فأن سرعة التغير في تركيز البيروفيت [B] هي d[B]/dt =V₁-V₂  حيث أن V1 = سرعة التفاعل الأولي و V2 = سرعة تفاعل الكاشف وعندما يكون الإنزيم الذي يساهم في التفاعل هو واحد فإن V1 تصل إلى قيمة ثابتة في الحال عند التفاعل وتبقى لبضع دقائق في حين ستكون قيمة V2 الأولية صفرا لان تركيز البيروفيت [B] في البداية كان صفرا حيث تزداد قيمة V2 كلما ازداد تركيز [B] طبقا لمعادلة ميكليس- منتن

وبما أن Vbmax, k^Bm لها علاقة بالتفاعل الذي يساهم في الإنزيم الكاشف E2 لبضع دقائق وبعد أن تصل V1 إلى قيمة ثابتة.

ففي الأنظمة المزدوجة يجب أن يصل تركيز B إلى قيمة ثابتة وبسرعة عالية للوصول إلى الحالة المستقرة في النظام بالسرعة الممكنة لفترة قصيرة تكفي للوصول إلى الحالة المستقرة حيث أن V^Bmax تتناسب طرديا مع تركيز الإنزيم الثاني، لذلك كلما كان تركيز E2 عاليا كلما سهل ذلك من الحصول على الحالة المستقرة للنظام في وقت سريح أي أن V2=V1, أما إذا كانت كمية E₂ قليلة جدا بحيث تصبح V^Bmax اقل من V₁ وففي هذه الحالة لا يمكن الوصول إلى الحالة المستقرة على الإطلاق مما يترتب على ذلك استمرارية زيادة قيمة تركيز B عند ذلك لا تصل قيمة V2 إلى قيمة V1 على الإطلاق مما يتوجب ذلك إضافة كمية كافية من الإنزيم الكاشف إلى نظام التفاعل المزدوج لضمان مرور اقل وقت ممكن قبل الوصول إلى الحالة المستقرة لكي تكون سرعة التفاعل الكاشف تتفق تقريبا مع سرعة التفاعل الأول، يجب أن يراعى الأس الهيدروجيني في التفاعل المزدوج بحيث تصبح جميع الإنزيمات نشطة على أس هيدروجيني الذي يجري فيه التفاعل وقد تحدث مشاكل عندما يكون المدى للأس الهيدروجيني ضيق لعمل الإنزيمات، ففي المثال التالي لتحويل السكروز إلى ماء والأوكسجين تساهم ثلاث إنزيمات والذي يكون أكثر تعقيد من التفاعل المزدوج، فأنه بالإمكان قياس نشاط إنزيم الانفرتيز بوجود كميات غير محددة من السكروز والأوكسجين والكلوكوز أكسيديز والبيروكسيديز ، فالانفرتيز فعال على أس هيدروجيني في حدود 5 والكلوكوز اوكسيديز في حدود 7-8 والبيروكسيديز فعال في حدود 10 قفي هذه الحالة من الصعب ربط فعالية الإنزيمات الثلاثة وقياسها على قيمة واحدة للأس الهيدروجيني إلا انه بالإمكان كل من الكلوكوز اوكسيديز والبيروكسيديز فعالة في حدود 8.5 حيث يمكن الاستفادة من ذلك في التفاعل المزدوج لقياس نشاط تحفيز إنزيم كلوكوز اوكسيديز.

مواضيع ذات صلة

الطرد المركزي

كيمياء أنسجة الإنزيمات enzyme histochemistry

التقسيم الخلوي الثانوي للإنزيمات

تقدير المناعة الإشعاعية للإنزيمات

تقدير حركية النشاط التحفيزي

التقدير الكمي لنشاط الإنزيم

تقدير الإنزيمات

اختيار المستحضر

isocitrate dehydrogenase

(Phosphofructokinase (PFKase

(Aspartate transcarbamoylase (AT Case

انزيم Phosphorylase