المرجع الالكتروني للمعلوماتية
المرجع الألكتروني للمعلوماتية

علم الاحياء
عدد المواضيع في هذا القسم 10456 موضوعاً
النبات
الحيوان
الأحياء المجهرية
علم الأمراض
التقانة الإحيائية
التقنية الحياتية النانوية
علم الأجنة
الأحياء الجزيئي
علم وظائف الأعضاء
المضادات الحيوية

Untitled Document
أبحث عن شيء أخر
{ان أولى الناس بإبراهيم للذين اتبعوه}
2024-10-31
{ما كان إبراهيم يهوديا ولا نصرانيا}
2024-10-31
أكان إبراهيم يهوديا او نصرانيا
2024-10-31
{ قل يا اهل الكتاب تعالوا الى كلمة سواء بيننا وبينكم الا نعبد الا الله}
2024-10-31
المباهلة
2024-10-31
التضاريس في الوطن العربي
2024-10-31

التربة
18-2-2016
القصف الحيوي المائي Aqueous Biolistics
7-6-2017
نكبة إتياخ ومقتله
24-9-2017
قوة العدو العسكرية
6-4-2016
تصلب الشرايين Atherosclerosis
14-6-2017
Schröder,s Method
14-12-2021

Membrane filtration method ISO 16266:2006 for Pseudomonas aeruginosa in water  
  
5561   12:49 صباحاً   date: 17-3-2016
Author : SILVA, N.D .; TANIWAKI, M.H. ; JUNQUEIRA, V.C.A.; SILVEIRA, N.F.A. , NASCIMENTO , M.D.D. and GOMES ,R.A.R
Book or Source : MICROBIOLOGICAL EXAMINATION METHODS OF FOOD AND WATE A Laboratory Manual
Page and Part :

Membrane filtration method ISO 16266:2006 for  Pseudomonas aeruginosa in water

 

This method of the International Organization for Standardization is applicable to bottled water and other types of water with a low background microflora, for example, pool waters and waters intended for human consumption.

1 . Material required for analysis

• Distilled or deionized water sterile (for dilutions if necessary)

• Membrane filtration system

• Sterile membrane filter 0.45μm nominal pore size

Pseudomonas CN Agar

• Acetamide Broth ISO

• King’s B Medium

• Nutrient Agar (NA)

• Oxidase Kovacs Reagent

• Nessler Reagent

• Laboratory incubator set to 36 ± 2°C

• Ultra violet lamp 360 ± 20 nm

2 . Procedure

A general flowchart for the enumeration of Pseudomonas aeruginosa in water using the membrane filtration method ISO 16266:2006 is shown in Figure.2.

a) Filtration: filter a suitable volume of the water sample through a sterile cellulose ester membrane filter with 0.45  μm pore. The volume depends on the type of sample. For drinking water or bottled water 100 ml is the volume commonly used.

For polluted water the volume should be smaller. When filtering less than 10 ml, mix the sample with 10–100 ml of sterile distilled or deionized water before filtration.

 Note a.1)   The sample volume should be adjusted to obtain plates with well separated colonies. If necessary, pre-pare and filter dilutions of the sample.

b)  Incubation and colony counting:  After filtration, remove the membrane with a sterile forceps and place on the surface of a  Pseudomonas CN Agar plate, avoiding air bubbles. Incubate the plates at 36 ± 2°C/44 ± 4 h and count after 22 ± 2 h and after 44 ± 4 h.

 Note b.1)   The reading after 22 h should be used to calculate the results in case of plates showing overgrowth and merging of colonies after 44 ± 4 h.

Count only the typical colonies which can be of three types:

  Type 1 colonies: Colonies that produce blue/green color (pyocyanin pigment). These colonies are considered P. aeruginosa without additional confirmatory tests.

  Type 2 colonies: Colonies non-pyocianin producing (non-blue/green) but fluorescent under ultra violet light (360 ± 20nm). These colonies are considered presumptive and should be confirmed by the acetamide growth test.

Figure 2   Scheme of analysis for the enumeration of Pseudomonas aeruginosa in water using the membrane filtration method ISO 16266:2006.

 

Type 3 colonies: Colonies non-pyocianin producing (non-blue/green) and non-fluorescent under ultra violet light (360  ± 20nm) but showing a reddish brown pigment (under visible light). These colonies are considered presumptive and should be confirmed by the oxidase test, the acetamide growth test  and the fluorescence on King’s B medium test.

c) Confirmation: Select as many colonies as possible for confirmation (all colonies if possible). Streak

each colony onto a Nutrient Agar (NA) plate and

incubate at 36 ± 2°C/22 ± 2 h. Select one well isolated colony from each NA plate for the confirmatory tests (check for purity by Gram stain before performing the tests).

 Note c.1)   Five is a number of colonies commonly used for confirmation and if there are fewer than five, all.

c.1)  Oxidase test: Using a platinum/iridium loop or glass rod, take a portion of a well-isolated colony from each NA plate and streak it onto a filter paper moistened with the Oxidase Kovacs Reagent. The appearance of a mauve, violet or deep blue color within 10s indicates a positive reaction. If a commercially avail-able oxidase test kit is used, follow the manufacturer’s instructions.

c.2)  Acetamide test: From the colony on NA inoculate a tube of Acetamide Broth ISO and incubate at 36 ± 2°C/22 ± 2 h. Add one or two drops of Nessler Reagent and observe. Color change varying from yellow to brick red is indicative of ammonia production (alkaline reaction) and considered a positive confirmed test for P. aeruginosa.

c.3)  Fluorescence on King’s B Medium: From the colony on NA inoculate a tube of King’s B Medium and incubate at 36 ± 2°C for five days. Examine daily for growth and fluorescence under ultra violet light (360 ± 20nm).

Consider any fluorescence appearing up to five days as a positive confirmed test for  P.  aeruginosa.

d)  Calculation of the results:  Interpret the results according to Table 3.

Calculate the number of  P. aeruginosa colony forming units per volume of sample examined according the formula below:

P = number of type 1 colonies on Pseudomonas CN Agar

F = number of type 2 colonies on Pseudomonas CN Agar

nF  = number of type 2 colonies submitted to confirmation

CF  = number of type 2 colonies confirmed as P. aeruginosa

R = number of type 3 colonies on Pseudomonas CN Agar

nR  = number of type 3 colonies submitted to confirmation

CR  = number of type 3 colonies confirmed as P. aeruginosa

Table.3  Guide for the interpretation of Pseudomonas aeruginosa confirmatory tests according the method ISO 16266:2006.

Example

Volume of sample examined = 100 ml

Number of type 1 colonies on  Pseudomonas CN Agar (P) = 20

Number of type 2 colonies on Pseudomonas CN Agar (F) = 12, five submitted to confirmation (cF = 5), two confirmed (nF = 2).

Number of type 3 colonies on  Pseudomonas CN Agar (R) = 10, five submitted to confirmation (cR = 5), one confirmed (nR = 1).

CFU/100 ml = 20 + 12 × (2/5) + 10 × (1/5) = 27

Alternatively express the result qualitatively by stating that P. aeruginosa was present or absent in the volume of water examined.

 

References

Silva, N.D .; Taniwaki, M.H. ; Junqueira, V.C.A.;  Silveira, N.F.A. , Nasdcimento , M.D.D. and Gomes ,R.A.R .(2013) . Microbiological examination methods of food and water a laboratory Manual. Institute of Food Technology – ITAL, Campinas, SP, Brazil .

International Organization for Standardization (2006) ISO 16266:2006. Water quality – Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa – Method by membrane filtration. Geneva, ISO.

 




علم الأحياء المجهرية هو العلم الذي يختص بدراسة الأحياء الدقيقة من حيث الحجم والتي لا يمكن مشاهدتها بالعين المجرَّدة. اذ يتعامل مع الأشكال المجهرية من حيث طرق تكاثرها، ووظائف أجزائها ومكوناتها المختلفة، دورها في الطبيعة، والعلاقة المفيدة أو الضارة مع الكائنات الحية - ومنها الإنسان بشكل خاص - كما يدرس استعمالات هذه الكائنات في الصناعة والعلم. وتنقسم هذه الكائنات الدقيقة إلى: بكتيريا وفيروسات وفطريات وطفيليات.



يقوم علم الأحياء الجزيئي بدراسة الأحياء على المستوى الجزيئي، لذلك فهو يتداخل مع كلا من علم الأحياء والكيمياء وبشكل خاص مع علم الكيمياء الحيوية وعلم الوراثة في عدة مناطق وتخصصات. يهتم علم الاحياء الجزيئي بدراسة مختلف العلاقات المتبادلة بين كافة الأنظمة الخلوية وبخاصة العلاقات بين الدنا (DNA) والرنا (RNA) وعملية تصنيع البروتينات إضافة إلى آليات تنظيم هذه العملية وكافة العمليات الحيوية.



علم الوراثة هو أحد فروع علوم الحياة الحديثة الذي يبحث في أسباب التشابه والاختلاف في صفات الأجيال المتعاقبة من الأفراد التي ترتبط فيما بينها بصلة عضوية معينة كما يبحث فيما يؤدي اليه تلك الأسباب من نتائج مع إعطاء تفسير للمسببات ونتائجها. وعلى هذا الأساس فإن دراسة هذا العلم تتطلب الماماً واسعاً وقاعدة راسخة عميقة في شتى مجالات علوم الحياة كعلم الخلية وعلم الهيأة وعلم الأجنة وعلم البيئة والتصنيف والزراعة والطب وعلم البكتريا.