فيما يأتي استعراض للطرائق الشائعة المستخدمة لتقدير الإثيلين كلايكول والكليسيرول التي لا تعتمد على تفاعل ملابراد:

لقد أمكن تقدير الإثيلين كلايكول في مصل الدم بطريقة طيفية أنزيمية حركية بإستخدام أنزيم الكحول ديهيدروجينيز (yeast alcohol dehydrogenase)، إذ تم ترسيب البروتينات من مصل الدم بمحلول 10% ثلاثي كلوروحامض الخليك (tri-chloroacetic acid) ، ثم تمت معاملة الراشح مع الأنزيم بوجود NAD⁺ والكاشف سيميكاربازايد (semicarbazide) عند pH 9.2 بوجود محلول الفوسفات المنظم  لتكوين NADH الذي يتم قياس إمتصاصه عند 340 نانوميتر⁽¹⁾.

أمكن أكسدة الإثيلين كلايكول كهربائياً على قطب البلاتين في المحاليل الحامضية ثم تقدير نواتج التفاعل بإستخدام كواشف لتكوين مشتقاتها (derivatising reagents) بطرائق كمية بكروماتوغرافيا السائل ذي الأداء العالي⁽²⁾.

تم تقدير الإثيلين الكلايكول (1000-10 ملغم/لتر) في مصل الدم بكروماتوغرافيا الغاز-مطياف الكتلة (GC-MS gas chromatography -mass spectrometry,) وذلك بعد تكوين مشتق البيوتيل الرباعي ثنائي مثيلسيليل (tert-butyldimethylsilyl derivative)⁽³⁾. وكما أمكن  تقديره في مصل الدم بعد تكوين المشتق نفسه (البيوتيل الرباعي ثنائي مثيلسيليل) بكروماتوغرافيا الغاز ذي العمود الشعري (gas chromatography capillary column) حيث أمكن تقدير 5000-100  ملغم/لتر من الإثيلين الكلايكول بنسبة إسترجاع 91%⁽⁴⁾. وكذلك أمكن تقديره بكروماتوغرافيا الغاز أيضا في مصل الدم على شكل أستر فنيلبورونات الحلقي (cyclic phenylboronate ester) حيث أمكن تقدير 5000-250 ملغم/لتر بمعدل نسبة الإسترجاع 97% ⁽⁵⁾.

وتم تقديره في الهواء بكروماتوغرافيا الغاز-مكشاف تأين اللهب (gas chromatography- flame ionization detection) ، حيث أمكن تقدير كميات 16-7 مايكروغرام لكل عينة⁽⁶⁾. وقد أمكن تقديره بكروماتوغرافيا الغاز في الدم والإدرار⁽⁷⁾.

كما تم تقدير الإثيلين كلايكول في البلازما بكروماتوغرافيا الغاز وذلك بتكوين أسترات البنزويل للإثيلين كلايكول التي تمتص الضوء فوق البنفسجي ويتم تحليلها بكروماتوغرافيا السائل-الطور المعاكس (reversed-phase liquid chromatography) وذلك بإستخدام الطور المتحرك المكوّن من الماء والميثانول، حيث بلغ حدود التقدير 10 -400  ملغم/لتر⁽⁸⁾. وأمكن تقديره أيضا في الدم بتراكيز 200-10 ملغم/لتر بكروماتوغرافيا الغاز وذلك بمزج الإثيلين كلايكول مع المحلول القياسي الداخلي    (internal standard) هكسان 2،5- دايون (hexane-2,5-dione) ، ثم إجراء التحليل بإستخدام عمود من الفولاذ عديم الصدأ ((stainless steel column عند  ^o170م ⁽⁹⁾.

أمكن تقدير الكليسيرول (0.8 - 0.1 مليمول) في السوائل البايولوجية والمشروبات، وذلك بإستخدام أنزيم كليسيرول ديهيدروجينيز المثبط                                 (immobilized glycerol dehydrogenase) حيث تم تفاعلهما عند pH10 ثم قياس إمتصاص NADH الناتج عند 340 نانوميتر⁽¹⁰⁾.
كما أمكن تقدير الكليسيرول في الخمور بوساطة تقنية التحليل بالحقن الجرياني بإستخدام أنزيم كليسيرول ديهيدروجينيز ثم القياس طيفياً، حيث تم تقدير تراكيز 0.30 - 0.03 غم/لتر بإنحراف قياسي نسبي أقل من 3.4 % ^(12،11). أمكن تقدير الكليسيرول (8-2 غم/لتر) في الخمور تفلورياً بوساطة تقنية التحليل بالحقن الجرياني بأكسدته  بوساطة بيتا-نيكوتينأمايد أدنين داينيوكليوتيد المؤكسد  (oxidised beta-nicotinamide adenine- dinucleotide, beta-NAD⁽⁺⁾)  بوجود الأنزيم كليسيرول ديهيدروجينيز كمثبط، ثم قياس الأنزيم المساعد ((coenzyme NADH المختزل تفلورياً عند طول موجة الإنبعاث 460 نانوميتر وبطول موجة الإثارة340  نانوميتر ⁽¹³⁾.

وقد تم تقدير الكليسيرول بتراكيز10-8  مليمول/لتر في المشروبات beverages)) بوساطة المتحسس الأنزيمي (enzymatic sensor) بإستخدام أغشية بكتيرية محتوية على بيرولوكوينولين كوينون (pyrroloquinoline quinone) بوجود أنزيم كليسيرول ديهيدروجينيز(glycerol dehydrogenase)  على أقطاب من الكاربون⁽¹⁴⁾. وأمكن تقدير الكليسيرول الناتج من تحلل ثلاثي الكليسيريد (إلى حد   12مليمول من triolein) أمبيرومترياً بالمتحسّس الحيوي (biosensor) بوجود أنزيم كليسيرول ديهيدروجينيز⁽¹⁵⁾. وأمكن تقدير الكليسيرول في شراب المستخلصات النباتية (plant-extract syrup) بتراكيز     مولاري بالمتحسس الحيوي الأمبيرومتري   (amperometric biosensor) بإستخدام أنزيم كليسيرول ديهيدروجينيز على أقطاب كاربون المحوّرة ( (NAD⁽⁺⁾-modified carbon  electrodes⁽¹⁶⁾.

أمكن تقدير الكليسيرول ( 1500-1مليمول/لتر) في الخمور بالتفاعلات الأنزيمية بوساطة تقنية الدالة الحامضية المشتقة (differential pH technique) وذلك بقياس pH الحامض المتحرر⁽¹⁷⁾.

أمكن تقدير الكليسيرول ومركبات سكرية بكروماتوغرافيا السائل ذي الأداء العالي  في الخمور بإستخدام طور متحرك حاوي على تتراهيدروفيوران 4%  وبروبانول 5% ⁽¹⁸⁾.

--------------------------------------------------

1. J. H. Eckfeldt, and R. T. Light, Clin. Chem., 1980, 26(9), 1278-1280; Anal. Abst., 1981, 40(4), 4D128.
2. ^*O. Cherstiouk, E. Savinova, L. Kozhanova and V. Parmon, React. Kinet. Catal. Lett., 2000, 69(2), 331-338.
3. ^***W. Porter, P. Rutter and H.Yao, J. Anal. Toxicol., 1999, 23(7), 591-597.
4. ^***H. Yao, W. Porter, Clin. Chem., 1996, 42(2), 292-297
5. ^**W. Porter and A. Auansakul, Clin. Chem., 1982, 28(1), 75-78.
6. ^***S. Pendergrass, Am. Ind. Hyg. Assoc. J., 1999, 60(4), 452-457.
7. ^***T. Guliaeva and K. Iakimova, Sud. Med. Ekspert., 1991, 34(2), 37-39.
8. ^**R. Gupta, F. Eng and M. Gupta, Clin. Chem., 1982, 28(1), 32-33.
9. R. O. Bost, and I. Sunshine, J. Anal. Toxicol., 1980, 4(2), 102-103; Anal. Abst., 1981, 40(5), 5D126.
10. W. Hinsch, and P. V. Sundaram, Clin. Chim. Acta, 1980, 104(1), 87-94; Anal. Abst., 1981,40(5),5D136.
11. ^**M. Segundo and A. Rangel, Anal. Chim. Acta, 2002, 458(1), 131-138.
12. ^*A. Rangel and I. Toth , Anal. Chim. Acta, 2000, 416(2), 205-210.
13. ^*E. C. M. Mataix, Talanta, 2000, 51(3), 489-496.
14. ^*I. Lapenaite, B. Kurtinaitiene, L. Marcinkeviciene, I. Bachmatova, and V. R. Laurinavicius, Chem. Pap.-Chem. Zvesti., 2001, 55(6), 345-349.
15. ^*J. Tkacs, J. Svitel, R. Novak and E. Sturdik, Anal. Lett., 2000, 33(12), 2441-2452.
16. M. A. Gonzalez, S. Saidman, M. L. Castanon, A. M. Ordieres, and P. T. Blanco, Anal. Chem., 2000, 72(3), 520-527.
17. ^*M. Luzzana, D. Agnellini, P. Cremonesi and G. Caramenti, Analyst, 2001, 126(12), 2149-2152.
18. ^*F. Chinnici, U. Spinabelli, A. Amati, F. Chinnici, U. Spinabelli and A. Amati, J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol., 2002, 25(16),
    2551-2560.