جمع الأكاروسات (جمع الحلم)

إن نجاح عملية جمع الأكاروسات يعتمد بدرجة كبيرة على الاختيار المناسب للمكان أو الموقع الذي سنأخذ منه العينة حيث أن جمع أنواع الحلم المفترس أرضي المعيشة يتطلب عدم البحث أو أخذ العينة من المناطق المكشوفة وإنما لابد من الذهاب إلى طبقة الدبال غير المتعرضة للشمس المباشرة حيث تتوفر فيها مثل هذه الأنواع ، أما بالنسبة لأنواع الحلم نباتية التغذية فإنها لا تعتمد على الأماكن المحمية وإنما تتحرك باستمرار على النبات الذي يوفر لها الرطوبة المناسبة جراء امتصاصها لعصارة النبات أما بالنسبة لأنواع الأكاروسات المتطفلة على الحيوانات فان وجودها يكون مرتبطا بالحيوانات وأماكن وجودها وحركتها وهكذا الحال بالنسبة لبقية الأكاروسات، كذلك فان صغر حجم الأكاروسات يجعل من الصعب الجمع المباشر للاكاروس بشكل عملي، لذلك فانه من المعتاد وتحت أغلب الظروف، فان أخذ العينات ومن ثم عزل الأكاروسات منها هو الأسلوب الأكثر استخداما في مجال دراسة الأكاروسات. وبشكل عام فان طرق جمع الأكاروسات وعزلها تتباين بحسب البيئة التي يعيش فيها الأكاروس وبحسب عادات التغذية والنشاط.

أولا: طرق جمع وعزل الأكاروسات أرضية المعيشة

Collecting and Isolating Terrestrial Mites

وتضم:

1- اكاروسات التربة Soil Mites

وتضم العديد من الأنواع المفترسة والأنواع فطرية ونباتية ورمية التغذية التي تعيش في الطبقة السطحية من التربة وتمارس أنشطتها الحيوية المختلفة فيها. حيث يتم أخذ عينات من التربة وبمساحة 0.5-1 م2 وعادة يتم أخذ العينة من الطبقة السطحية للتربة وبعمق 5-1سم وبعد أخذ العينات يمكن فصل أو عزل الأكاروسات منها باتباع إحدى الطرق الآتية:

أ– استخدام قمع بيرليزي - توليكرن Tullgren Funnel -Berlese ويعتمد عمل هذا القمع على استخدام مصدر حراري يعمل على طرد الأكاروسات بعيدا باتجاه قنينة الجمع الموجودة أسفل هذا القمع وهو تحوير لقمع بيرليزي. حيث يتم وضع عينة التربة على الغربال الموجود في قاعدة القمع فيما يوجد في غطاء القمع مصدر حراري هو عبارة عن مصباح مما يعمل على طرد الأكاروسات من العينة وإجبارها للنزول إلى أسفل القمع والسقوط أخيرا في قنينة جمع الأكاروسات (الشكل التالي). إن قوة المصباح (الواطية) المستخدمة في القمع يعتمد بالدرجة الأساس على:

• حجم العينة.

• المحتوى الرطوبي للعينة.

• بعد العينة عن المصباح.

إن الواطية العالية للمصباح قد تتسبب أيضا في موت نسبة عالية من الحلم وخاصة الأنواع ذات الكيوتكل غير السميك والبطيئة الحركة. كما أن الواطية الأقل من 40 واط قد تعمل على إطالة فترة العزل، ومن المفضل أن لا يزيد حجم العينة عن 10-12 لتر وعادة يفضل بقاء العينة في القمع مدة أربعة أيام. إن الحلم المعزول من العينة بهذه الطريقة يتم جمعه في مادة حافظة هي عبارة عن كحول تركيز 70% كما يفضل عدم بقاء الأكاروسات في الكحول لفترة طويلة حيث أن الكحول قد يعمل على تصلب الأنسجة الداخلية مما قد يؤثر على عملية تحميل عينة الأكاروس على الشرائح الزجاجية.

إما في حالة الرغبة بالحصول على أفراد الأكاروسات حية فتوضع في قنينة الجمع شرائط من ورق الترشيح مبللة بالماء لتوفير الرطوبة والحماية الكافية للأكاروسات من الموت بسبب الجفاف. إن قمع بيرليزي - توليكرن يعتبر من الناحية النوعية طريقة جيدة وناجحة لفصل الأكاروسات ولكنها غير دقيقة في الدراسات الكمية للاكاروسات حيث أن الكثير من الأكاروسات قد تتمكن من الهروب من القمع أو قد تبقى ملتصقة بالعينة.

شكل يبين أدوات جمع وعزل الأكاروسات. أ: قمع بيرليزي -توليكرن ، ب: شافطة ذات البصلة أو الكرة المطاطية ، ج: قمع بوخنر للترشيح الفراغي. (عن Krantz ، 1978)

ب- طريقة الطفو Flotation Method

وفي هذه الطريقة يتم وضع عينة التربة في إناء ذو مساحة سطحية واسعة نسبيا وتغمر العينة بالماء مع التقليب الجيد ويفضل إضافة بعض الكيروسين أو الزيت الخفيف حيث يطفو الكيروسين أو الزيت بشكل طبقة رقيقة على سطح الماء تتجمع فيها الأكاروسات لأنها تمتلك كيوتكل محب للدهون حيث يمكن فصل الأكاروسات منها وعدها.

ج- طريقة طبقة دهن التشحيم Grease Film Method

وتعتمد هذه الطريقة على وضع عينة التربة في حوض فيه ماء وفي هذا الحوض يوجد ذراع دوار يحوي قطعة مسطحة من البلاستيك مغلفة بطبقة من زيت التشحيم الأبيض وكنتيجة لدوران القطعة البلاستيكية المسطحة في حوض الماء يتم التصاق الاكاروسات الموجودة في محلول التربة حيث تنزع هذه القطعة البلاستيكية وتفحص لحساب عدد الأكاروسات الملتصقة فيها.

2- الأكاروسات المرتبطة بالنبات Phytophagous Mites

وتضم مجموعة كبيرة من الأنواع نباتية التغذية ومفترساتها من الأكاروسات ويعد النبات بيئة غير متجانسة مقارنة بالماء والهواء وهذا راجع إلى أن الوحدات الممثلة لهذه البيئة غير متشابهة فضلا عن التغير المستمر في نمو النبات. ففي حالة المحاصيل الحقلية والخضراوات وأشجار الفاكهة التي يزرعها الإنسان تكون متجانسة نوعا ما، أما في حالة النباتات البرية فلا يوجد مثل هذا التجانس لأنها تختلف في النوع وعدد النباتات في وحدة المساحة ونظرا لصغر حجم الأكاروسات فان عملية أخذ العينات وعزل الأكاروسات منها يمكن أن تتم كما يلي:

أ– الجمع المباشر للاكاروسات Direct Collecting

هذه العملية تتم بجمع الأكاروسات المرتبطة بالنبات مباشرة من على النباتات المصابة وذلك باستخدام فرشاة صغيرة أو شافطة صغيرة Bulb aspirator. والغرض من هذه العملية هو تشخيص أو تحديد الأنواع الموجودة على النباتات ولا تستخدم هذه الطريقة لتقدير الكثافة العددية للاكاروسات.

ب- الضرب على النبات أو أحد أجزائه Beating Plant Parts

وتتم هذه الطريقة بضرب النبات أو جزء منه بواسطة عصا مع وضع صينية فيها طبقة من الزيت الخفيف حيث يتساقط الأكاروس نتيجة الضرب ويستقر في أسفل الصينية ويتم حساب أعداده وهي طريقة بسيطة وسهلة وخاصة عندما يقتضي الأمر أخذ عينات كثيرة.

في أحيان كثيرة قد يتطلب الأمر أخذ عينات من أجزاء النباتات أو المحاصيل المصابة كالبراعم والأوراق والثمار وجلبها إلى المختبر لعزل وجمع الأكاروسات منها وحساب أعدادها وفي هذه الحالة يمكن اتباع ما يلي:

أ– استخدام جهاز Henderson وهو جهاز بسيط يتركب من فرشاتين من شعر ناعم قطر كل منها 4/3 الانج وطولها 4 انجات ومركبتين بشكل أفقي وقريبتين جدا من بعضهما ويتحركان بواسطة محرك كهربائي صغير حركة دورانية إلى الداخل حيث أن كل فرشاة مركبة بعكس اتجاه الأخرى، كما يوجد أسفلهما وعلى بعد عدة انجات قرص معدني دائري قطره 60سم يتحرك حركة دورانية بواسطة المحرك وتغطي المسافة بين القرص وأعلى الفرشتين قليلا أسطوانة معدنية لتمنع تناثر الأكاروسات خارج القرص وقبل تشغيل الجهاز يوضع قرص زجاجي مع القرص المعدني قطره أكبر من القرص المعدني بمقدار 12سم ويدهن من سطحه العلوي بمادة لاصقة وعند التشغيل تدور الفرشتين ثم يتم إدخال ورقة النبات المراد فحصها بين الفرشتين فتتساقط جميع أطوار الأكاروس على القرص الزجاجي وتلتصق به وتتوزع عليه توزيعا متجانسة لحد ما ثم يعاد إدخال ورقة النبات مرة ثانية بين الفرشتين للتأكد من خلوها تماما من الأكاروسات بعدها يؤخذ القرص الزجاجي لحساب ما عليه من اكاروسات.

ب- طريقة طبع الأثر Trace Printing Method

وتتم هذه العملية باستخدام جهاز بسيط عبارة عن قطعة معدنية مسطحة مثبت عليها عجلتين من المطاط يتم إدخال ورقتي ترشيح بينهما وتوضع بين الورقتين ورقة النبات حيث يتم سحب ورقتي الترشيح بين العجلتين اللتين تضغطان على الورقة النباتية فتظهر بقع على ورق الترشيح وعدد هذه البقع يمثل أعداد الأكاروسات على الورقة النباتية ومن عيوب هذه الطريقة أنها لا تميز بين الأكاروسات نباتية التغذية والمفترسات وكذلك لا تميز بين الأكاروسات والحشرات الصغيرة الموجودة على الأوراق كحشرات الثريس والمن.

ج- طريقة الغسيل Washing Method

وتتم هذه الطريقة باستعمال بعض المحاليل الكيميائية مثل الصابون المخفف بالماء أو محلول كحولي مخفف وفي هذه الطريقة يتم غسل الأجزاء النباتية التي ترتبط بها الأطوار المختلفة للاكاروسات غسلا جيدة واستقبال محلول الغسيل في إناء حيث يتم بعدها حساب عدد الإفراد أو الأطوار المختلفة للاكاروس وذلك باعتماد أحد الطرق الآتية:

1- وحدة المساحة: وتتم بوضع قرص من ورق أبيض مقسم إلى مربعات أو قطاعات متساوية المساحة أسفل طبق بتري الحاوي على المحلول الذي يضم الأكاروسات بأطوارها المختلفة ويتم حساب هذه الأطوار في المربع أو القطاع ثم يضرب العدد في عدد القطاعات أو المربعات التي يحويها القرص ليتم الحصول على العدد التقريبي لأطوار الأكاروس.

2- وحدة الحجوم: وفي هذه الطريقة يتم أخذ أنابيب صغيرة حجم كل منها يتراوح بين 0.5 – 1 سم3 سبق معايرتها لتثبيت عدد الأكاروسات التي يمكن أن تملأ هذه الأنابيب حيث تستخدم بعد ذلك لهذا الغرض إذ يتم حساب عدد الأنابيب المملوءة بالاكاروسات ويضرب عددها في المتوسط العددي المسجل لكل أنبوب فنحصل على العدد الكلي للاكاروسات في العينة.

إن الطرق المذكورة سابقا قد أثبتت فاعليتها وكفاءتها في عزل الأكاروسات نباتية التغذية إلا أن هذه الطرق غير كفوءة في عزل الأكاروسات خاصة تلك التابعة لمجموعة الحلم الاريوفي أو الدودي والتي تعيش داخل البراعم والأنسجة النباتية والمسببة للانتفاخات والأورام النباتية المختلفة لذلك فان عزل مثل هذه الأكاروسات يتطلب اتباع ما يلي:

أ- طريقة التشريح Dissection Method: حيث يتم جلب عينات الأورام أو البراعم أو الانتفاخات المتسببة عن الحلم الاريوفي وذلك بوضعها في أكياس ورقية ويتم تشريح هذه الأجزاء تحت المجهر لعزل الحلم منها. وفي أحيان كثيرة قد تكون هذه الأجزاء جافة وفي هذه الحالة يمكن تسخين هذه الأجزاء النباتية في وسط مكون من الماء وال Chloral hydrate لكي تصبح لينة ويمكن تشريحها بعد ذلك.

ب- طريقة الطرد المركزي Centrifuge Method: هذه الطريقة استخدمت بنجاح في عزل حلم براعم الحمضيات Eriophyes sheldoni Ewing وذلك بغمر البراعم المصابة في ماء مقطر ووضعها في جهاز الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة وعلى سرعة 300 دورة / دقيقة. حيث يتم فصل الحلم عن الأجزاء النباتية نتيجة التباين في الوزن الجزيئي للبروتين النباتي والحيواني.

3- اكاروسات المواد المخزونة Stored Products Mites:

تهاجم الأكاروسات كما سبق الإشارة جميع المواد المخزونة نباتية أو حيوانية المصدر وأن عملية عزل هذه الأكاروسات لأغراض الدراسات النوعية والبيئية والحياتية يمكن أن يتحقق من خلال اتباع ما يلي:

أ- طريقة قمع بيرليزي - توليكرن.

ب- طريقة الطفو كما في عزل اكاروسات التربة.

ج- طريقة النخل Sieving Method: وتعتمد هذه الطريقة على نخل المواد المخزونة وفصل الأكاروسات خلال مناخل ذات قياسات معينة.

د - طريقة الهجرة Migration Method: وتستخدم هذه الطريقة في الغالب في حالة عزل الأكاروسات من المزارع المختبرية إذ يغادر الحلم المزرعة نتيجة للازدحام حيث يتم جمع الحلم المغادر للمزرعة وقد استخدمت هذه الطريقة بنجاح مع أنواع مختلفة من الحلم التابع العائلة Acaridae وخاصة الأنواع التابعة للجنس Rhizoglyphus و Tyrophagous ومن مميزات هذه الطريقة أنها تساعد في الحصول على حلم نظيف.

ثانيا: اكاروسات المياه العذبة والمالحة Aquatic Mites

طرق عديدة استخدمت في عزل الأكاروسات من البيئات المائية وتعتمد جميع هذه الطرق على طبيعة معيشة هذه الأكاروسات فيما إذا كانت حرة المعيشة أو مرتبطة مع الحيوانات والنباتات الموجودة في البيئة المائية. فبالنسبة للاكاروسات المائية حرة المعيشة فانه يمكن اعتماد ما يلي لجمع وعزل هذه الأكاروسات:

أ- الشباك اليدوية Nets: وهي تشبه لحد كبير الشباك المستخدمة لصيد الحشرات الهوائية حيث تتألف من شبكة قوية لها ذراع صلب ومدعمة تدعيما جانبية وتتكون الشبكة من سلك ناعم خاص، تتحرك الشبكة أفقية لتجرف معها الماء والاكاروسات التي تحجز بواسطة السلك المشبك. هناك نوع آخر من الشباك اليدوية تكون على هيئة مغرفة مكونة من نصفين النصف العلوي مكون من سلك شبكي والنصف السفلي مصنوع من معدن، تغرف كمية الماء بواسطة نصف المغرفة المعدني ثم تقلب على النصف الشبكي فيخرج الماء وتبقى الأكاروسات ويراعى عند استخدام هذه الشباك أن تجرى العملية بهدوء حتى لا تحدث تموجات شديدة في الماء تؤدي إلى هروب الاكاروسات.

ب- استخدام المضخات Pumps : حيث يتم استخدام مضخات خاصة لسحب الماء إلى مجموعة من الغرابيل التي تحجز الأطوار المختلفة من الأكاروسات ويمكن استخدام هذه المضخات في الزوارق.

أما بالنسبة للاكاروسات المائية التي ترتبط بشدة بالبيئة التي تعيش فيها كطين القاع أو الاشنات أو الطحالب أو تلك التي تعيش متطفلة على النباتات والحيوانات البحرية فانه يمكن اتباع ما يلي:

أ- يتم استخلاص الأكاروسات الموجودة في الطين المائي بأخذ عينة الطين ووضعها في إناء ثم إضافة محلول سلفات المغنيسيوم المركز وترك الإناء لمدة 15 دقيقة حيث يطفو الأكاروس على سطح الماء ويمكن جمعه وحسابه بعد ذلك. كذلك يمكن استخدام نفس طرق عزل الديدان الثعبانية لعزل الأكاروسات المرتبطة بالطين أو الاشنات والطحالب.

ب- يمكن عزل الأكاروسات المرتبطة أو المتطفلة على النباتات بأخذ عينة من النباتات وهرسها وغمرها بمحلول ماء البحر مع إضافة 15 مل من الكلوروفورم لكل 100 لتر ماء أو أحد الايثرات المهلجنة Halogenated ether حيث يؤدي ذلك إلى تخدير الأكاروسات مما يؤدي إلى تركه للبيئة الملتصق بها وبعد 30 دقيقة يمكن ترشيح المحلول للحصول على الأكاروسات ووضعها في كحول تركيز 95% لحفظها.

ثالثا: طرق جمع وعزل الأكاروسات المتطفلة على الحيوانات

Collecting and Isolating Animal Parasitic Mites

1- الأكاروسات المتطفلة على الحيوانات الفقرية Vertebrate Parasitic Mites

يتم جمع الحلم المتطفل على الفقريات إما بأخذ عينة من بيئة العائل كالأعشاش ومتبقيات الحيوانات أو أرضيات الاسطبلات ومن ثم عزل الأكاروسات منها باستخدام إحدى الطرق الآتية:

أ- قمع بيرليزي - توليكرن.

ب- طريقة الطفو.

ج- الغربلة.

د- استخدام غاز ثاني أوكسيد الكاربون لجذب القراد الموجود داخل شقوق الحظائر والأبنية والأعشاش.

كما قد يتم جمع الأكاروسات المتطفلة من العائل مباشرة وذلك باتباع ما يلي:

أ- طريقة الفحص والعد المباشر: وتتبع هذه الطريقة في حالة القراد خاصة وبعض أنواع الحلم المرتبط بالريش.

ب- طريقة التمشيط: وفيها تستخدم أمشاط ذات أسنان رفيعة للحصول على القراد.

ج- طريقة التبخير: حيث يوضع الحيوان المصاب كالطائر مثلا في قفص محكم على أن يكون رأس الطائر خارج القفص يتم حقن غاز مخدر داخل القفص لتخدير الأكاروسات المتطفلة وتساقطها أسفل قفص التبخير.

د- إزالة شعر أو ريش الحيوان ووضعه في محاليل معينة لفصل الحلم المتطفل .

هـ- تخدير العائل: حيث يتم تخدير الحيوان العائل وذلك بحقنه بمادة ال Phenylcyclidin hydrochloride تركيز 10% وبجرعة 1 ملغم/كغم من وزن الحيوان حيث أن هذه الطريقة تمنع التضحية بالعائل حيث تتساقط الأكاروسات من على أجسامها.

و- بالنسبة للحيوانات الميتة يمكن غمرها بالماء مع إضافة أحد الصبغات الكاشفة مما يؤدي إلى إزالة الكثير من الأكاروسات المتطفلة، بعدها ينقل المحلول إلى إناء آخر لجمع الأكاروسات أو ترشيح المحلول خلال ورق الترشيح ثم فحص ورقة الترشيح.

أما بالنسبة للاكاروسات المتطفلة داخلية على الفقريات فان الحصول عليها يتطلب إجراء بعض العمليات الجراحية للأعضاء المصابة.

2- الاكاروسات المتطفلة على اللافقريات Invertebrate Parasitic Mites

إن الأكاروسات المتطفلة على اللافقريات توجد في أماكن مختلفة فبالنسبة للاكاروسات المتطفلة على الحشرات يلاحظ وجودها على قواعد قرون الاستشعار والأجنحة وتجاويف حراقف الأرجل وفي الفتحات التنفسية وجميع هذه الأنواع يمكن جمعها وعزلها باستخدام فرشاة رفيعة جدا أو دبوس.

أما الأكاروسات المتطفلة داخلية على الفقرات فانه يمكن الحصول عليها بتشريح الجزء المصاب بحثا عن الحلم المتطفل.