الكوثرة المتعددة Multiplex PCR

تقنية تستعمل لتضخيم أكثر من قطعة من DNA او هدف من الشريط القالب في نموذج واحد وفيها يستعمل زوج من البوادئ لكل هدف . والأفضل تصميم بادئ يضخم أكثر من هدف او أكثر من منطقة .وعلى العموم فالبوادئ المستعملة في خليط التفاعل المستعمل تكون ذات درجات حرارة التحام متشابه و GC % لارتباط الحرارة الأولى ودرجة الانصهار بالمحتوى من GC . كما انه يجب الأخذ بنظر الاعتبار طول النواتج المضخمة حتى يمكن التمييز بينها عند فصلها على الهلام . وتعاني التقنية من مشاكل عدة منها :
- البدء الخاطئ نتيجة لعدم الارتباط المتخصص الى DNA المستهدف .
- حدوث مزدوجات للبوادئ المستعملة .
- عدم قابلية فصل قطع DNA المضخم النقي على الهلام اذا كانت حركتها (وبالتالي حجمها ) متشابهة.
وتوجد برامج خاصة لتصميم البوادئ لمثل هذه التقنيات . اذ تقوم بتصميم مجموعة من البوادئ PS) Primer Set) وهذه تستعمل في التطبيقات السريرية والبيئة الميكروبية والكشف عن الاضطرابات الوراثية . ومثل هذه المجاميع من البوادئ تتصف بالمواصفات العامة للبوادئ الأخرى مثل طول توالي البادئ ونواتج التضخيم التي تكون بحدود 100 - 500 قاعدة . وحرارة انصهار البادئ الأيسر والأيمن بالحدود المعروفة الواقعة بين 58 - 65º م والاختلاف بين البادئين يكون بحدود 3 ºم ، والطاقة الحرة لخمس ثمالات في الطرف '3 تكون بحدود 9 كيلوسعرة مول . وفضلا" عن ذلك هناك بعض المؤشرات الأخرى التي يجب ان تؤخذ بنظر الاعتبار في MP PCR وهي وان ذكرت أعلاه الا انه يجب التشديد عليها وهي :
- عدم الازدواج بين البوادئ المستخدمة
- تشابه حرارة الانصهار لكل بادئ
- تخصص البادئ يجب ان يكون عاليا" لتجنب فشل عملية البدء
- تقيد وتحديد حركة المتضخمات (نواتج PCR ) في الهلام لغرض فصل وتنقية النواتج بسهولة .